新基因LRP15参与紫外线诱导的DNA损伤的修复作用

目的探讨LRP15基因在K562细胞中对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用，以进一步研究该基因的功能。方法利用真核表达质粒pcDNA3．1构建LRP15基因开放阅读框架（ORF）序列的正义及反义重组质粒；两种质粒经阳性脂质体介导法分别转染K562细胞，G418筛选阳性克隆；采用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术观察两组细胞对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用的差异。结果PCR鉴定证实，正义及反义重组质粒中LRP15基因ORF序列均按预定方向正确插入；SCGE实验表明，经紫外线照射后两组细胞的DNA基础损伤无明显差异（P=0.156）。但经45及90min修复后实验组细胞的DNA迁移长度明显小于对照细胞（P〈0．001）。结论成功构建LRP15基因的正义及反义真核表达质粒；LRP15基因对紫外线诱导的DNA损伤具有修复作用，可能是一个DNA修复基因。     

铁蛋白对多发性骨髓瘤诊断中的临床意义

  目的 探讨血清铁蛋白(serum ferritin, SF)水平对多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)诊断的临床意义。方法 选择2016-01至2018-06在同济大学附属第十人民医院血液科初治的32例MM患者和39例健康志愿者(对照组)作为研究对象,MM组患者已排除引起铁蛋白升高的其他因素。比较MM组与对照组SF表达水平。通过ROC曲线检测SF在MM患者中的诊断价值,随访32例MM组患者每次化疗前的SF水平以及相应的β₂-微球蛋白(β₂-microglobulin,β₂-MG)水平及乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)水平共计169人次,并对检测结果进行统计分析。结果 MM组SF(546.60±427.66)ng/ml明显高于对照组(231.20±111.70)ng/ml,差异有统计学意义(t=4.06,P=0.000)。ROC曲线分析中,SF水平曲线下面积为0.75(P=0.000),具有一定的诊断意义。随访32例MM患者共169人次,定期化疗前SF与β₂-MG有正相关关系(r=0.714,P<0.01),而与LDH水平无明显相关关系(r=0.059, P>0.01)。Ⅲ期MM患者中SF水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SF对MM有辅助诊断价值,能反映一定程度的肿瘤负荷,SF结合β₂-MG对MM患者分期和预后判断有重要价值。     

LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS—PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示：白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论：甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值。     

LRP15基因的表达谱分析及其在白血病细胞中的表达

为检测LRP15基因在肿瘤细胞以及处于不同发育阶段造血细胞的表达状况 ,探讨其在肿瘤发生、发展以及在白血病分型预后中可能具有的作用 ,利用NCBI提供的SAGE文库及NCI提供的正常组织及肿瘤细胞基因表达数据库 ,分析比较了LRP15基因在多种肿瘤组织、细胞系和正常组织中的表达谱 ;采用RT PCR方法检测了该基因在正常血细胞及原代白血病细胞中的表达状况。结果显示 ,LRP15在人类多种正常组织及肿瘤细胞中有表达 ;在幼稚细胞中表达阳性率高于成熟细胞 (P <0 .0 1) ,在急性髓细胞白血病中M1、M2 和M3 表达的阳性率高于其它亚型 (P <0 .0 1) ;难治组LRP15表达的阳性率有高于初治组的趋势。结论 ,LRP15基因与急性白血病及其它多种肿瘤的发生、发展密切相关 ,对急性白血病的临床分型具有重要的意义 ,可能对判断急性白血病的预后具有一定价值。     

更昔洛韦对TK基因转染的淋巴瘤细胞的抑制作用

 目的探讨GCV对TK基因转染的淋巴瘤细胞生长的抑制作用.方法利用缺陷型逆转录病毒介导的TK基因(RV-HSV-TK)转染淋巴瘤细胞,细胞增殖实验(MTT法),研究GCV对转染TK基因阳性淋巴瘤细胞株杀伤作用.结果转染了TK基因的淋巴瘤细胞的生长曲线与未转染TK基因的细胞无差异.0.1～50μg/ml的GCV对转染阳性细胞有明显的毒性作用,杀伤效应与时间成正比.Hut-tk细胞对Hut细胞具有旁观者效应.结论RV-HSV-TK系统对淋巴瘤细胞有较高的转染效率,转染了TK基因的淋巴瘤细胞对GCV敏感.     

新的白血病相关基因LRP15真核表达载体构建及在K562细胞中的表达

 目的构建LRP15基因开放阅读框架(ORF)序列的真核表达载体,并观察其在K562细胞中的表达情况.方法采用RT-PCR方法自1例白血病患者中克隆LRP15cDNA片段,将目的基因LRP15克隆入pGEM-T载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定.将鉴定过的DNA片段插入真核质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA-LRP15.脂质体介导法将其转染K562细胞,72 h以RT-PCR方法检测转染细胞中LRP15基因的表达情况.结果酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人LRP15基因ORF序列;转染实验表明LR15基因能在K562细胞中表达.结论成功构建LRP15基因真核表达载体,并在K562细胞中获得表达,为进一步研究LRP15基因的功能奠定了基础.